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同聚物加尾连接 人工接头连接 平端连接 粘性末端连接 非粘性末端连接
可用同一限制性内切酶产生粘性末端连接 不同限制性内切酶切割则不能连接 平末端切口可采用 ―尾接法‖ 平末端切口可直接连接 均需DNA连接酶参与
连接平末端时只有DNA连接酶起作用,缺乏粘性末端的突出碱基的互补作用 常用的DNA连接酶与平末端的亲和力比粘性末端的大 提高DNA连接酶浓度是改__末端连接效率低下的有效方法 适当提高温度也是改__末端的连接效率低下的有效方法
a的基本骨架是磷酸和核糖交替连接而成的结构 只要能获得相同的粘性末端,可以用不同种b切割a和d c连接双链间的A.和T.,使粘性末端处碱基互补配对 若要获得已知序列的d,可从基因库直接获取
a的基本骨架是磷酸和核糖交替连接而成的结构 使用某些不同的b去切割a和d,也可能获得相同的粘性末端 c连接双链间的氢键,使得粘性末端处碱基互补配对 若要获得未知序列的d,可用DNA合成仪人工合成
DNA连接酶连接的是两条链碱基对之间的氢键 DNA连接酶连接的是粘性末端两条链主链上的磷酸和脱氧核糖 DNA连接酶连接的是粘性末端两条链主链上的磷酸和核糖 同一种DNA连接酶可以切出不同的粘性末端
甲、乙、丙粘性末端是由各自不同的限制性核酸内切酶催化产生的 甲、乙具相同的粘性末端可形成重组DNA分子,但甲、丙之间不能 DNA连接酶作用位点在b处,催化磷酸基团和脱氧核糖之间形成化学键 切割甲的限制性核酸内切酶不能识别由甲、乙片段形成的重组DNA分子
粘性末端连接 平头末端连接 粘性末端与平头末端连接 DNA连接子技术 DNA适配子技术
同聚物加尾连接 人工接头连接 粘性末端连接 缺口末端连接 平端连接
能产生5’粘性末端 能产生3’粘性末端 能产生平末端 具有5’→3’和3’→5’核酶外切酶活性 催化ATP中心r-磷酸转移到核酶5’-末端
平端 5’突出的粘性末端 3’突出的粘性末端 钝性末端 配伍末端
平头末端 3’突出末端 5’突出末端 粘性末端 缺口末端
粘性末端与粘性末端的连接 平端与平端的连接 粘性末端与平端的连接 人工接头连接 同聚物加尾连接
a的基本骨架是磷酸和核糖交替连接而成的结构 使用某些不同的b去切割a和d,也可能获得相同的粘性末端 c连接双链间的氢键,使得粘性末端处碱基互补配对 若要获得未知序列的d,可用DNA合成仪人工合成
5’粘性末端 3’粘性末端 平末端 单链缺口 粘性末端