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表达载体中的胰岛素基因可通过人肝细胞mRNA反转录获得 表达载体的复制和胰岛素基因的表达均启动于复制原(起)点 借助抗生素抗性基因可将含胰岛素基因的受体细胞筛选出来 启动子和终止密码子均在胰岛素基因的转录中起作用
制作果醋时,必须向发酵装置不断补充氧气 固定化酵母细胞用CaCl2溶液作载体 在进行植物组织培养和动物细胞培养时,细胞都必须先进行脱分化 基因表达载体中的复制原点处比较容易打开双链,是因为它位于基因的首端,是RNA聚合酶识别和结合的部位
基因表达载体中的复制原点处比较容易打开双链,是因为它位于基因的首端,是RNA聚合酶识别和结合的部位 物种大都是经过长期的地理隔离,最后出现生殖隔离而形成的 三倍体植物不能由受精卵发育而来 mRNA上的每三个相邻的碱基决定一个氨基酸
目的基因的转运 目的基因的扩增 目的基因的表达 目的基因的定位
E.coRI限制酶切割DNA后,既可能留下黏性末端,也可能留下平末端 E.coliDNA连接酶既能连接双链DNA的黏性末端,也能连接平末端 “分子运输车”的条件之一是有复制原点,以便目的基因在宿主细胞中表达 运载体种类多样,质粒、动、植物病毒、λ噬菌体的衍生物等都可能成为运载体
小型环状双链 DNA分子 携带有某些耐药基因 在细胞分裂时恒定地传递给子代细胞 具有自我复制能力 获得目的基因
表达载体中的胰岛素基因可通过人肝细胞mRNA逆转录获得,再通过PCR扩增
表达载体的复制和胰岛素基因的表达均始于复制原点
借助抗生素抗性基因可以将含胰岛素基因的受体细胞筛选出来
表达载体中的启动子和终止密码子均在胰岛素基因的转录中起作用
质粒是一种独立于细菌拟核外的链状DNA分子 所有的质粒都可以作为基因工程中的载体 质粒载体的复制和表达不遵循中心法则 作为载体的质粒常含有抗生素抗性基因
目的基因的转运 目的基因的扩增 目的基因的表达 目的基因的定位
是可以不依赖染色体而自身复制的遣传物质 容易将外来基因拼接于自身之中而成为基因组的一部分 有遣传标记(如抗药性),可作为对重组体选择标记 可作为DNA克隆载体 是染色体DNA的一部分
表达载体中的胰岛素基闪可通过人肝细胞mRNA反转录获得 表达载体的复制和胰岛素基因的表达均启动于复制原(起)点 借助抗生素抗性基闵可将含胰岛素基因的受体细胞筛选出来 启动子和终止密码+均在胰岛素基因的转录中起作用
转基因植物操作时,受体细胞用植物的受精卵或者体细胞均可 我国转基因抗虫棉利用花粉管通道法将基因表达载体导入棉花细胞 乳腺生物反应器的设计需要基因表达载体上有乳腺蛋白基因的启动子 作为基因工程的载体质粒,因为其具有能自我复制,含有标记基因,为单链DNA等特点
制作果醋时,必须向发酵装置不断补充氧气 固定化酵母细胞用CaCl2溶液作载体 在进行植物组织培养和动物细胞培养时,细胞都必须先进行脱分化 基因表达载体中的复制原点处比较容易打开双链,是因为它位于基因的首端,是RNA聚合酶识别和结合的部位
PCR是一项在生物体外复制特定的DNA片段的核酸合成技术 PCR的原理是DNA双链复制 利用PCR获取目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列 PCR扩增中必须有解旋酶才能解开双链DNA
已知某染色体上的DNA分子中G碱基的比例为20%,那么,由此DNA克隆出来的某基因中碱基C的比例是20% 已知基因表达载体中的复制原点处比较容易打开双链,那么,由此可以推断该处是RNA聚合酶识别和结合的部位 已知基因中碱基G和T共有180个,那么,经转录和翻译形成的多肽共有肽键59个 已知含100个碱基对的DNA分子中胸腺嘧啶有60个,那么,该DNA分子连续复制2次需要游离的胞嘧啶脱氧核苷酸120个
载体可以用来携带目的基因片段进入受体细胞 根据功能的不同,可以将载体分为克隆载体和表达载体两大类 载体不能在受体细胞中自主复制 载体中通常带有某些特定的药物抗性基因 载体中通常有一个由数个单一酶切位点组成的多克隆位点
A+T的比例较高 位于基因的首端,是RNA聚合酶识别和结合的部位 C+G的比例较高 位于基因的尾端,是转录停止的信号
PCR是一项在生物体外复制特定的DNA片段的核酸合成技术 PCR技术的原理是DNA双链复制 利用PCR技术获取目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列 PCR扩增中必须有解旋酶才能解开双链DNA
A.+T的比例较高 C.+G的比例较高 位于基因的首端,是RNA聚合酶识别和结合的部位 位于基因的尾端,是转录停止的信号