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将任意两个DNA分子连接起来 将具有相同的黏末端的DNA分子连接,包括DNA分子的基本骨架和碱基对之间的氢键 只连接具有粘性末端的DNA分子的基本骨架即磷酸二酯键 只连接具有粘性末端的DNA分子碱基对之间的氢键
同聚物加尾连接 人工接头连接 平端连接 粘性末端连接 非粘性末端连接
粘性末端连接 平末端连接 平末端与粘端直接相连 同聚物加尾连接 人工接头连接
连接平末端时只有DNA连接酶起作用,缺乏粘性末端的突出碱基的互补作用 常用的DNA连接酶与平末端的亲和力比粘性末端的大 提高DNA连接酶浓度是改__末端连接效率低下的有效方法 适当提高温度也是改__末端的连接效率低下的有效方法
DNA连接酶连接的是两条链碱基对之间的氢键 DNA连接酶连接的是粘性末端两条链主链上的磷酸和脱氧核糖 DNA连接酶连接的是粘性末端两条链主链上的磷酸和核糖 同一种DNA连接酶可以切出不同的粘性末端
甲、乙、丙粘性末端是由各自不同的限制性核酸内切酶催化产生的 甲、乙具相同的粘性末端可形成重组DNA分子,但甲、丙之间不能 DNA连接酶作用位点在b处,催化磷酸基团和脱氧核糖之间形成化学键 切割甲的限制性核酸内切酶不能识别由甲、乙片段形成的重组DNA分子
粘性末端连接 平头末端连接 粘性末端与平头末端连接 DNA连接子技术 DNA适配子技术
同聚物加尾连接 人工接头连接 粘性末端连接 缺口末端连接 平端连接
能产生5’粘性末端 能产生3’粘性末端 能产生平末端 具有5’→3’和3’→5’核酶外切酶活性 催化ATP中心r-磷酸转移到核酶5’-末端
平端 5’突出的粘性末端 3’突出的粘性末端 钝性末端 配伍末端
平头末端 3’突出末端 5’突出末端 粘性末端 缺口末端
甲、乙、丙粘性末端是由各自不同的限制性核酸内切酶催化产生的 甲、乙具相同的粘性末端可形成重组DNA分子,但甲、丙之间不能 DNA连接酶作用位点在b处,催化磷酸基团和脱氧核糖之间形成化学键 切割甲的限制性核酸内切酶不能识别由甲、乙片段形成的重组DNA分子
粘性末端与粘性末端的连接 平端与平端的连接 粘性末端与平端的连接 人工接头连接 同聚物加尾连接
5’粘性末端 3’粘性末端 平末端 单链缺口 粘性末端