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核酸的分子杂交 核酸的变性 最适温度 核酸的复性 核酸探针
复性在已变性 DNA分子的两条互补链之间进行 DNA分子越大复性时间越长 热变性的 DNA需经缓慢冷却方可复性 变性过程可发生在 DNA和RNA链之间 热变性的 DNA在低温状态下复性可迅速发生
温度要逐渐冷下来 DNA不均一时易复性 DNA浓度高是易复性 DNA溶液中盐浓度高时不易复性
变性DNA在适当条件下可恢复天然的双螺旋构象,称为复性 DNA复性速度受温度的影响 加热后使温度缓慢下降才能复性 加热后迅速冷却至4℃以下才能复性
热变性后相同的DNA经缓慢降温冷却后可以复性 热变性的DNA迅速降温的过程称为退火 所有DNA分子变性后,在合适的温度下都可以复性 热变性的DNA迅速冷却后即可再结合为双链 复性的最佳温度时64℃
50%双链结构被解开时的温度称为DNA的Tm 紫外光吸收值降低 热变性的DNA经缓慢冷却后即可复性 黏度降低 DNA分子中GC含量越高Tm值越大
溶液Ⅰ的作用是悬浮菌体 溶液Ⅱ的作用是使DNA变性 溶液Ⅲ的作用是使DNA复性 质粒DNA分子小,所以没有变性,染色体变性后不能复性 该方法简单,重复性好,在实验中经常使用
热变性的DNA维持原温度即可复性 热变性的DNA在降温过程中可复性 热变性的DNA经加热处理后即可复性 热变性的DNA经酸处理后即可复性 热变性的DNA经酶切后即可复性
粘度降低 紫外光吸收值降低 热变性的DNA经缓慢冷却后即可复性 50%双链结构被解开时的温度称为DNA的Tm DNA分子中GC含量越高Tm值越大
热变性后相同的 DNA经缓慢冷却后可复性 不同的DNA分子变性后,在合适温度下都可复性 热变性的DNA迅速降温过程也称作退火 复性的最佳温度为 250C 热变性DNA迅速冷却后即可相互结合
DNA变性后,对260nm处紫外光的吸光率增加,这种现象称为增色效应 DNA热变性发生在一个狭窄的温度范围内,增色效应呈爆发式 DNA变性达到50%时的温度称为解链温度或熔解温度 DNA经热变性后快速冷却,变性后的单链DNA又可以回复到原来的双螺旋结构,这一过程成为退火 适宜的复性温度是Tm-25℃左右
不同长度的DNA分子变性后,在合适温度下复性所用的时间基本相同 热变性后的DNA.经缓慢冷却后可复性 热变性的DNA迅速降温过程也称作退火 复性的最佳温度为700C-850C
溶液Ⅰ的作用是悬浮菌体 溶液Ⅱ的作用是使DNA变性 溶液Ⅲ的作用是使DNA复性 质粒DNA分子小,所以没有变性,染色体变性后不能复性 该方法简单,重复性好,在实验中经常使用
变性时出现减色效应 变性温度一般在100℃ 引起DNA两条链间氢键断裂的因素都可使其变性 变性导致分子共价键断裂 高温是DNA变性的唯一因素
变性后磷酸二酯键断裂 OD不变 G、C含量越多,Tm值越大 DNA双链间氢键断裂而解链 DNA变性后通常不能复性
溶液I2的作用是使DNA变性 溶液I3的作用是使DNA复性 溶液I1的作用是悬浮菌体 质粒DNA分子小,所以没有变性,染色体变性后不能复性 该方法简单,重复性好,在实验中经常使用
正常DNA加热即出现的现象 变性DNA在适当条件下出现的一种现象 两条互补链重新恢复天然的双螺旋构象 热变性的DNA经缓慢冷却后即可复性 比Tm低25℃的温度是DNA复性的最佳条件