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产生的β射线能量弱易防护 其衰变过程中不产生电离辐射强的β射线,对标记多肽蛋白抗原分子的免疫活性影响较小 125I释放的γ射线测定方法简便,易于推广应用 125I在半衰期、核素丰度、及计数率方面都较I更为适用 化学性质活泼,容易用较简便的方法制备标记物
ch-T法 LPO法 Bolton-Hunter法 HPLC法 碳化二亚胺法
直接标记法仅能用于含酪氨酸的化合物 间接标记法可标记缺乏酪氨酸的肽类及某些蛋白 间接标记法对蛋白质的损伤小 氯胺T标记法是最常用的间接标记法 间接标记法是以^125I标记在载体上,纯化后再与蛋白质结合
比放射性,标记物的亲合力和免疫活性 标记物的亲合力,放射化学纯度和免疫活性 放射化学纯度,比放射性和免疫活性 免疫活性,标记物的特异性和标记物的亲合力 标记物的特异性,比放射性和免疫活性
125I的化学性质不活泼 125I衰变过程中产生的β射线能量弱易防护 125I对标记多肽、蛋白抗原分子的免疫活性影响较小 125I的半衰期为8天 125I的核素丰度为20%
避免氧化剂和蛋白质直接接触,对蛋白质活性影响较小 125I通过SHPP连接到蛋白质分子表面赖氨酸残基的氨基或蛋白质的活性中心,蛋白质生物活性影响较少 在蛋白质分子内载体分子引起位阻效应,影响其生物活性,对分子量小的蛋白质影响更明显 由于标记过程分两步进行,故碘标记蛋白质的比放射性和碘的利用率较直接标记法低 常用的氧化剂是氯胺T
胶过滤法 离子交换法 超速离心法 高效液相色谱法 聚丙烯酰胺凝胶电泳
标记方法简便,易获得高比放射性标记物 放射性测量方法简便,效率高 对标记化合物影响较少,不影响抗原免疫学活性 标记物保存期较长 放射性废弃物处理较易
标记方法简便 放射性测量方法简便,效率高 易获得高比放射性标记物 标记物保存期较长 放射性废弃物处理较易
FT4I不高,125I—T3吸收率增高 TT3高,125I—T3结合率偏高 TT3高,125I—T3吸收率增高 TT3高,125I—T3结合率降低 TT3高,125I—T3结合率降低
免疫活性鉴定 125I标记化合物的制备 比放射性鉴定 放射性核素标记物的纯化 标记物的化学损伤和自身辐射损伤
直接标记法仅能用于含酪氨酸的化合物 间接标记法可标记缺乏酪氨酸的肽类及某些蛋白 间接标记法对蛋白质的损伤较小 氯胺T标记法是最常用的直接标记法 间接法标记蛋白质的比较放射性高于直接法
BT%值应大于80% 游离碘应在总放射碘的15%以下 少量抗原与过量抗体反应后B/(B+F)大,表示标记抗原损伤小 标记抗原的比放射性越高测定越敏感 比放射性的计算要根据放射性碘的利用率
游离碘应在总放射碘的15%以下 少量抗原与过量抗体反应后B/(B+F)大,表示标记抗原损伤小 标记抗原的比放射性越高,测定越敏感 比放射性的计算要根据放射性碘的利用率 标记后抗原的BT%应>>80%