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限制性内切酶在特定的位置上切割质粒和供体DNA分子 载体DNA和供体DNA在连接酶的作用下末端相连形成重组DNA 除质粒外,λ噬菌体可作为重组 DNA的载体 筛选含重组DNA的细菌通常可根据载体对抗生素的抗性来进行 以质粒为载体构建的重组DNA分子引入宿主细胞时需与宿主 DNA结合
限制性内切酶在特定的位置上切割质粒和供体DNA分子 载体DNA和供体DNA在连接酶的作用下末端相连形成重组1DNA 除质粒外,λ噬菌体可作为重组 DNA的载体 筛选含重组DNA的细菌通常可根据载体对抗生素的抗性来进行 以质粒为载体构建的重组DNA分子引入宿主细胞时需与宿主 DNA结合
同源重组不需要特异的 DNA序列 同源重组要求两分子间序列必须相同 RecB.C.D具有内切酶和解旋酶活性 Holliday 中间体的形成,是同源重组的重要步骤 需要DNA连接酶参与
甲、乙、丙的黏性末端是由三种限制酶催化产生的 甲、乙之间可形成重组DNA分子,但甲、丙之间不能 DNA连接酶催化磷酸基团和核糖之间形成化学键,该反应有水产生 切割甲的限制酶不能识别由甲、乙片段形成的重组DNA分子
甲、乙、丙的黏性末端是由三种限制酶催化产生的 甲、乙之间可形成重组DNA分子,但甲、丙之间不能 DNA连接酶催化磷酸基团和核糖之间形成化学键,该反应有水产生 切割甲的限制酶不能识别由甲、乙片段形成的重组DNA分子
限制性内切酶在特定的位置上切割质粒和供体DNA分子 载体DNA和供体DNA在连接酶的作用下末端相连形成重组DNA 除质粒外,入噬菌体可作为重组DNA的载体 筛选含重组DNA的细菌通常可根据载体对抗生素的抗性来进行 以质粒为载体构建的重组DNA分子引入宿主细胞时需与宿主DNA结合
使DNA片段与载体结合 坚决重组DNA片段 催化质粒与噬菌体的链接 获得较小的DNA片段 扩增特定DNA序列
催化质粒与噬菌体的连接 获得较小的DNA片段 扩增特定DNA序列 使DNA片段与载体结合 鉴定重组DNA片段
形成重组DNA分子过程在细胞内进行 用DNA连接酶就可将目的基因和质粒形成重组质粒 DNA连接酶能够连接被限制性核酸内切酶断开的化学键 重组DNA分子上的抗性基因可用于目的基因的检测与表达
甲、乙、丙粘性末端是由各自不同的限制性核酸内切酶催化产生的 甲、乙具相同的粘性末端可形成重组DNA分子,但甲、丙之间不能 DNA连接酶作用位点在b处,催化磷酸基团和脱氧核糖之间形成化学键 切割甲的限制性核酸内切酶不能识别由甲、乙片段形成的重组DNA分子
限制性内切酶 限制性外切酶 DNA连接酶 DNA聚合酶 Taq酶
质粒、噬菌体可作为载体 限制性内切酶是主要工具酶之 重组DNA由载体DNA和目标DNA组成 重组DNA分子经转化或转染可进入宿主细胞 进入细胞内的重组DNA均可表达目标蛋白
使DNA片段与载体结合 坚定重组DNA片段 催化质粒与噬菌体的链接 获得较小的DNA片段 扩增特定DNA序列
DNA聚合酶Ⅰ DNA连接酶 DNA修饰酶 DNA聚合酶Ⅱ
甲、乙、丙粘性末端是由各自不同的限制性核酸内切酶催化产生的 甲、乙具相同的粘性末端可形成重组DNA分子,但甲、丙之间不能 DNA连接酶作用位点在b处,催化磷酸基团和脱氧核糖之间形成化学键 切割甲的限制性核酸内切酶不能识别由甲、乙片段形成的重组DNA分子