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重组的目的基因或DNA片段可以来源基因组DNA、cDNA和人工合成的DNA片段 载体最常见的是质粒、噬菌体和逆转录病毒 DNA重组本质上是一个酶促化学反应 从理论上而言,重组反应的最佳温度为25℃ DNA重组的方法有粘端连接法和平端连接法
细菌质粒 DNA 噬菌体 DNA 病毒 DNA 酵母人工染色体 真核细胞基因组 DNA
细菌质粒DNA 噬菌体DNA 病毒DNA 酵母人工染色体 人基因组DNA
克隆该基因,测序,寻找其中是否含Mu序列 克隆该基因到质粒载体上,并转化其他细菌观察是否出现突变子 构建一个基因文库,并以Mu序列及lacDNA为探针,筛选文库,看两种探针是否与同一DNA片段杂交 以上方法都适用
一种限制性核酸内切酶可以在DNA的任何部位切割 DNA连接酶和运载体是构建重组质粒必需的工具酶 DNA连接酶在连接DNA片段时一般不具特异性 质粒是广泛存在于细菌细胞质中的一种颗粒状的细胞器
细菌质粒DNA 噬菌体DNA 病毒DNA 酵母人工染色体
charomid plasmid cosmid phagemid
DNA分子上有一个至多个限制酶切割位点,供外源DNA基因插入其中 质粒是一种裸露的、结构简单、独立于细菌拟核之外的特殊DNA 质粒是具有自我复制能力的很小的双链环状DNA分子 质粒DNA分子上都具有四环素抗性基因、氨苄青霉素抗性基因
选择一个适合的载体 限制性核酸内切酶在特异位点裂解质粒和目的基因 用连接酶连接载体 DNA和目的DNA,形成重组体 用载体的相应抗生素抗性筛选含重组体的细菌 重组体用融合法导入细胞
全染色体DNA探针 染色休克隆片段DNA探针 质粒DNA探针 rRNA基因(rDN探针 寡核苷酸探针
重组的目的基因或DNA片段可以来源基因组DNA、cDNA和人工合成的DNA片段 载体最常见的是质粒、噬菌体和逆转录病毒 DNA重组本质上是一个酶促化学反应 从理论上而言,重组反应的最佳温度为25℃ DNA重组的方法有粘端连接法和平端连接法