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样品的不均匀性 分离不完全或色谱峰拖尾 溶解样品的溶剂与流动相不能互溶 进样不出峰
液相阀进样 液相阀进样 毛细管柱液相注射锅分流讲样 桂箱温度越高,组分越难分离
如想除去色谱柱上残留的蛋白质,可用乙睛腈、丙酮和三氟醋酸(0.1%)梯度洗脱 如为及相柱、可用水、含水甲醇或乙腈,甲醇或乙腈依次冲洗 每次实验操作结束后,应将色谱柱取下置通风干燥处 应避免压力、温度和流动相的比例急剧变化及任何机械振动 如为正相柱,三氯甲烷的洗脱能力强于水 经常用强溶剂冲洗色谱柱,清除保留在柱内的杂质
输出压力要高,一般可高400~500Kg/cm 液缸答积小、适于梯度洗脱 流量范围要宽,分析型应在0.1~10mL/min范围内连续可调 密封性好,耐腐蚀 外形看起来需协调美观 流量要稳定,其RSD应<0.5%
化学发光检测器 蒸发光散射检测器 紫外检测器 电导检测器 荧光检测器 示差折光检测器
输液系统 分离系统-色谱柱 进样系统 检测系统 数据处理系统
输液系统 分离系统-色谱柱 进样系统 检测系统 数据处理系统
流动相为任何液体物质 输液泵的工作压力不能超过规定的最__力,否则会使__密封坏变形,产生漏液 含有缓冲液的流动相不应停泵过夜或保留在泵内更长时间 防止任何固体微粒进入泵体,流动相应过滤 防止流动相耗尽空泵运转,导致柱塞磨损、缸体或密封损坏。最终产生漏液 流动相应脱气,以免在泵内产生气泡,影响流量的稳定性
高效液相色谱与气相色谱使用不同的移动相,但固定相种类与特性大致相同 挥发性药物(如丙戊酸钠)不能通过任何方式用高效液相色谱检测,只能用气相色谱检测 高效液相色谱依靠__泵输送移动相而气相色谱通常只需要靠容器的压力输送移动相 气相色谱通常通过切换阀(通常为六通阀)实现进样,而高效液相色谱则通常采用直接进样或者顶空进样 通常高效液相色谱梯度与气相色谱梯度原理相同,都是通过调节移动相洗脱强度实现
液相阀进样 填充桂气相迷射器进样 毛细管柱液相注射锅分流进样 气相阀进样
升高温度 采用更灵敏的检测器 增加色谱柱长度 采用小颗粒固定相 减小色谱柱直径 提高流动相流速
高效液相色谱的色谱泵通常在常压下运行,只需保持流速的精密度即可 蒸发光检测器是一种通用检测器,可以用于无紫外吸收药物的检测,但不可以用于挥发性物质的检测 色谱填料是色谱柱的填充物,也是色谱分离的核心,通常而言,填料为大小均匀、耐有机溶剂、表面对药物具有作用力的微球 色谱系统的管路、连接头、检测池对色谱柱效并没有明显的影响,所以高效液相色谱仪可以具有很长的流路管路 “塞状进样”指样品导入色谱柱后呈瓶塞状分布,与色谱柱有关而与进样溶液无关