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以DNA复制为基础而建立起来的技术 利用PCR技术可完全无误的扩增基因 反应体系需要模板、引物、四种脱氧核苷酸、耐热DNA聚合酶和缓冲溶液 以变性、复性和延伸为一个周期
PCR技术的原理是DNA复制 是一酶促反应,需耐高温的解旋酶加DNA聚合酶 一个DNA片段经PCR扩增,可以形成2n个DNA片段(n代表循环次数) PCR利用了DNA的热变性来控制DNA的解聚与结合
DNA链大段缺失 DNA链插入 跨越基因的损伤 DNA断裂 光镜下可见
升高温度是 DNA变性的唯一原因 DNA热变性是一种渐进过程,无明显分界线 变性必有 DNA分子中共价键断裂 核酸变性是 DNA的独有现象,RNA无此现象 凡引起DNA氢键断裂的因素都可使其变性
磷酸二酯键断裂 A260降低 DNA变性后溶液黏度升高 变性是可逆的 热变性是缓慢发生的
变性DNA在适当条件下可恢复天然的双螺旋构象,称为复性 DNA复性速度受温度的影响 加热后使温度缓慢下降才能复性 加热后迅速冷却至4℃以下才能复性
磷酸二酯键断裂 A260降低 DNA变性后溶液黏度升高 变性是可逆的 热变性是缓慢发生的
变性后 m 260nm 波长吸收不改变 变性时两条链解离 变性时二级结构被破坏 变性不伴有共价键断裂 加热可导致变性
DNA变性是DNA降解过程 DNA变性不涉及共价键的断裂 DNA变性是氢键断裂变成单键的过程 热和酸碱度的改变可以引起DNA变性 变性过程通常伴随260nm紫外吸光度值增高
DNA变性后,对260nm处紫外光的吸光率增加,这种现象称为增色效应 DNA热变性发生在一个狭窄的温度范围内,增色效应呈爆发式 DNA变性达到50%时的温度称为解链温度或熔解温度 DNA经热变性后快速冷却,变性后的单链DNA又可以回复到原来的双螺旋结构,这一过程成为退火 适宜的复性温度是Tm-25℃左右
变性过程中A260的光吸收增加 GC%含量相同的情况下,碱基排列顺序对Tm值具有明显影响 降低DNA溶液中的盐离子浓度,可以提高Tm值 双链DNA变性后,沉降速度加快
DNA变性是DNA降解过程 DNA变性不涉及共价键的断裂 DNA变性是氢键断裂变成单链的过程 热和酸碱度的改变可以引起DNA变性 变性过程通常伴随260nm紫外吸光度值增高
升高温度是变性的惟一原因 DNA热变性是一种渐进过程,无明显分界线 变性必定伴随有DNA分子中共价键的断裂 核酸变性是DNA的独有现象,RNA无此现象 凡引起DNA两股互补链间氢键断裂的因素都可使其变性
使70%~80%的DNA变性时的温度 使50%的DNA分子变性时的温度 DNA被加热至70~85℃时的黏度 DNA变性时所含的G、C的浓度 DNA完全变性时的温度
正常DNA加热即出现的现象 变性DNA在适当条件下出现的一种现象 两条互补链重新恢复天然的双螺旋构象 热变性的DNA经缓慢冷却后即可复性 比Tm低25℃的温度是DNA复性的最佳条件