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常用原核生物作为受体细胞,是因为原核生物繁殖快,且多为单细胞,遗传物质相对较少 受体细胞所处的一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态称为感受态 感受态细胞吸收DNA分子需要适宜的温度和酸碱度 感受态细胞吸收重组表达载体DNA分子的液体只要调节为适宜的pH即可,没必要用缓冲液
实验中常用MgCl2处理后建立感受态 处于感受态时,载体细胞壁和膜的通透性增加 感受态时线状DNA比环状DNA转化效率高 选用的细菌处于稳定期为实验成功的关键 本法操作要求在常温下进行操作
重组表达载体DNA分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合即完成了转化 农杆菌转化法是将目的基因导入植物细胞采用最多的方法,但对大多数单子叶植物并不适用 需通过某种处理使大肠杆菌成为感受态细胞,以便进一步完成转化 显微注射技术是将含有目的基因的表达载体注射到受精卵中
有人工感受态细胞和自然感受态细胞。 具有可诱导性。 有可转移性。 不同种细菌出现感受态的生理时期不同。 不同种细菌出现感受态的比例不同。
常用原核生物作为受体细胞,是因为原核生物繁殖快,且多为单细胞、遗传物质相对较少 受体细胞所处的一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态称为感受态 感受态细胞吸收DNA分子需要适宜的温度和酸碱度 感受态细胞吸收重组表达载体DNA分子的液体只要调节为适宜的pH即可,没必要用缓冲液
处于感受态时,载体细胞壁和膜的通透性增加 感受态时线状DNA比环状DNA转化效率高 实验中常用MgCl处理后建立感受态 选用的细菌处于稳定期为实验成功的关键 本法操作要求在常温下进行操作
0℃ B.16℃ C.37℃ D.25℃ E.42℃
CaCl2 KCl MgCl2 CaSO4 (NH)SO
KCl MgCl CaCl CaSO (NH)SO
显微注射法 病毒侵染法 土壤农杆菌转化法 感受态细胞转化法
实验中常用MgCl2处理后建立感受态 处于感受态时,载体细胞壁和膜的通透性增加 感受态时线状DNA比环状DNA转化效率高 选用的细菌处于稳定期为实验成功的关键 本法操作要求在常温下进行操作