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变性过程中破坏的是DNA分子内碱基对之间的磷酸二酯键 复性过程中引物与DNA模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成的 延伸过程中需要DNA聚合酶、ATP和四种核糖核苷酸 PCR与细胞内DNA复制相比所需要酶的最适温度较高
37℃左右 72℃左右 55℃左右 100℃左右 94℃左右
变性过程中破坏的是DNA分子内碱基对之间的氢键 复性过程中引物与DNA模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成 延伸过程中需要DNA聚合酶、ATP、四种核糖核苷酸 PCR与细胞内DNA复制相比所需酶的最适温度较高
55~59℃ 90~99℃ 60~71℃ 72~89℃ >100℃
变性过程中破坏的是DNA分子内碱基对之间的氢键 复性过程中引物与DNA模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成 延伸过程中需要耐热DNA聚合酶、ATP和四种核糖核苷酸 PCR与细胞内DNA复制相比所需要酶的最适温度较高
变性过程中破坏的是DNA分子内碱基对之间的氢键 复性过程中引物与DNA模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成 延伸过程中需要DNA聚合酶、ATP、四种核糖核苷酸 PCR与细胞内DNA复制相比所需要酶的最适温度较高
核苷酸序列呈对数方式增加 PCR技术需要合成引物 DNA变性解链的温度为70—75℃ 所需要的酶为限制酶
变性过程中破坏的是DNA分子的空间结构,这种变性是可逆的 复性过程中引物与DNA模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成的 延伸过程中需要DNA聚合酶、ATP、四种脱氧核糖核苷酸 PCR与细胞内DNA复制相比所需要酶的最适温度较高
提取标本中的DNA <90℃变性 55℃左右退火 72℃左右扩增 扩增产物作凝胶电泳
60~71℃ 90~99℃ 55~59℃ 72~89℃ >100℃
提取标本中的 DNA <90℃变性 55℃左右退火 72℃左右扩增 扩增产物作凝胶电泳
90~99℃ 60~71℃ 55~59℃ 72~89℃ >100℃
提取标本中的DNA 55℃左右退火 <90%变性 72℃左右扩增 扩增产物作凝胶电泳
变性过程中破坏的是DNA分子内碱基对之间的氢键 复性过程中引物与DNA模板链的结合依靠碱基互补配对原则完成 延伸过程中需要DNA聚合酶、ATP、四种核糖核苷酸 PCR与细胞内DNA复制相比所需要酶的最适温度较高
酶促反应需要高的温度,是为了确保模板是单链 延伸的温度必须大于复性温度,而小于变性温度 DNA聚合酶不能热变性,要用耐高温的聚合酶 DNA解旋酶不能热变性,为了确保模板是单链
55~59℃ 90~99℃ 60~71℃ 72~89℃ >100℃
55~59℃ 60~71℃ 90~99℃ 72~89℃ >100
55℃左右退火 <90%变性 提取标本中的DNA 72℃左右扩增 扩增产物作凝胶电泳
酶促反应需要高的温度,是为了确保模板是单链 延伸的温度必须大于复性温度,而小于变性温度 DNA聚合酶具有耐高温的能力 DNA解旋酶具有耐高温的能力
变性过程中破坏的是DNA分子内碱基对之间的氢键 复性过程中引物与DNA模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成 延伸过程中需要DNA聚合酶、ATP和四种核糖核苷酸 PCR与细胞内DNA复制相比所需要酶的最适温度较高