常用的平末端DNA片段连接法有____________和_____

重组的目的基因或DNA片段可以来源基因组DNA、cDNA和人工合成的DNA片段载体最常见的是质粒、噬菌体和逆转录病毒 DNA重组本质上是一个酶促化学反应从理论上而言，重组反应的最佳温度为25℃ DNA重组的方法有粘端连接法和平端连接法

是以一条单链DNA为模板合成一条新链的酶可以将断开的两个DNA片段连接起来，完成DNA的重组 连接两条DNA链上碱基之间的氢键连接平末端效率比连接黏性末端效率高

可用同一限制性内切酶产生粘性末端连接不同限制性内切酶切割则不能连接平末端切口可采用 ―尾接法‖ 平末端切口可直接连接均需DNA连接酶参与

黏性末端连接平端连接黏性末端与平端的连接人工接头连接同聚物加尾连接

将单个核苷酸加到某DNA片段末端，形成磷酸二酯键 将断开的两个DNA片段的骨架连接起来，重新形成磷酸二酯键 连接两条DNA链上碱基之间的氢键 只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间连接起来

催化相同黏性末端的DNA片段之间的连接催化平末端的DNA片段之间的连接催化两个黏性末端互补碱基氢键的形成催化DNA分子两条链的脱氧核糖与磷酸之间磷酸二酯键的形成

Klenow片段连接酶碱性磷酸酶末端转移酶

黏性末端连接平端连接黏性末端与平端的连接人工接头连接同聚物加尾连接

载体最常见的是质粒,噬菌体和逆转录病毒 DNA重组本质上是一个酶促化学反应重组的目的基因或DNA片段可以来源基因组DNA,cDNA和人工合成的DNA片段从理论上而言，重组反应的最佳温度为25℃ DNA重组的方法有粘端连接法和平端连接法

连接平末端时只有DNA连接酶起作用，缺乏粘性末端的突出碱基的互补作用常用的DNA连接酶与平末端的亲和力比粘性末端的大提高DNA连接酶浓度是改__末端连接效率低下的有效方法适当提高温度也是改__末端的连接效率低下的有效方法

平末端连接粘末端连接加接头连接同聚尾连接 T载体连接

①② ③④ ①④ ②③

将单个核苷酸加到某DNA片段末端，形成磷酸二酯键将断开的两个DNA片段的骨架连接起来，重新形成磷酸二酯键连接两条DNA链上碱基之间的氢键只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间连接起来，而不能将双链DNA片段末端之间进行连接

①③ ②④ ②③ ①④

所有DNA连接酶 T₄ DNA连接酶 E.coli DNA连接酶 DNA聚合酶

①③ ②④ ②③ ①④

只能连接黏性末端只能连接平末端能够连接DNA双链的氢键既可以连接黏性末端，又能连接平末端

常用的平末端DNA片段连接法有、和__等。