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以RNA为模板合成cDNA 引物长度约10个核苷酸 逆转录酶既催化cDNA的合成又催化模板RNA的水解 逆转录酶具有3’→5’外切酶活性和5’→3’外切酶活性
反转录反应不需要引物 反转录后的产物是cDNA 反转录的模板可以是RNA,也可以是DNA 合成链的方向是3’-5’
除去RNA引物后修补的DNA片段 DNA模板的一段DNA 在随从链上由引导合成的DNA片段 引物酶催化合成的RNA片段 在领头链上合成的DNA片段
rDNA DNA 载体(噬菌体或质粒) RNA dDNA
以RNA为模板合成cDNA 引物长度约10个核苷酸 逆转录酶既催化cDNA的合成又催化模板RNA的水解 逆转录酶具有3'→5'外切酶活性和5'→3'外切酶活性
使DNA-polⅢ活化 解开DNA双连 提供5’-P合成DNA链 提供3’-OH合成DNA链 提供5’-P合成RNA链
提供模板 打开DNA双链 催化合成DNA子链 使DNA聚合酶能从3’端延伸DNA链
当它达到每一个单链的末端时,所需的DNA聚合酶6从模板上释放下来 因为合成是从起始点双向进行的 导致合成冈崎片段 意味着仅当第一条链合成之后才合成第二条链
RNA为模板合成DNA 需要一个具有3’-OH的引物 cDNA链的延长,其方向为3’→5’ 底物是四种dNTP
从特定组织或细胞中提取DNA或RNA 用反转录酶合成mRNA的对应单链DNA 以新合成的单链DNA为模板合成双链DNA 新合成的双链DNA甲基化
检验新合成的cDNA序列是否正确 水解RNA-DNA杂交分子中的RNA 产生一小段RNA分子作为引物 将RNA复制为DNA E.将单链DNA变成双链DNA
以RNA为模板合成cDNA 需要4种dNTP为原料 合成反应的方向为3'→5' 转录起始不需要引物参与(35/2011)
DNA复制所需要的引物的作用是使DNA聚合酶能从3’端延伸DNA链 引物与DNA母链的关系是碱基互补配对 添加缓冲溶液的作用是维持pH基本不变 DNA聚合酶可以用来合成引物
寡核苷酸探针 用PCR方法合成的探针 以DNA为模板转录的RNA双链探针 以cDNA为模板转录的cRNA单链探针 质粒随机引物法标记的探针
DNA复制所需要的引物的作用是使DNA聚合酶能从3’端延伸DNA链 引物与DNA母链的关系是碱基互补配对 添加缓冲溶液的作用是维持pH基本不变 DNA聚合酶可以用来合成引物
模板上的一段DNA 在子链上合成的DNA片段 在5'-->3'链上由引物引导合成的不连续的DNA片段 除去RNA引物后修补的DNA片段
以RNA为模板合成cDNA 引物长度约10个核苷酸 逆转录酶既催化cDNA的合成又催化模板RNA水解 引物不是以病毒RNA为模板合成的