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最常用的偶联指示系统有两个:一个是脱氢酶系统,另一个为氧化酶系统 以脱氢酶为指示酶的系统测定的是辅酶Ⅰ(NAD+)或辅酶(NADP+)在540nm处的吸光度增高来计算出被测物的浓度 可利用脱氢酶的逆反应,将NAD(P)H变为NAD(P),测定340nm处吸光度的下降来计算被测物的浓度 终点法受到乳糜、黄疸和溶血的影响,测定时需设定样品空白 为了消除内源性脱氢酶的干扰,在反应时一般加入乳酸脱氢酶的抑制剂
硫辛酸 NAD+ NADP + NADPH FAD
NADH在340 nm波长处有吸收峰 NAD+ 在280 nm 波长处有吸收峰 NAD+在340 nm波长处有吸收峰 NADH在280 nm 波长处有吸收峰 只是由于乳酸脱氢酶分布广,容易得到
硫辛酸 NAD+ NADP + NADPH FAD
硫辛酸 NAD+ NADP + NADPH FAD
在不停止酶反应条件下测底物的变化量 在不停止酶反应条件下测产物的变化量 临床上应用最广泛的有NAD(P)H反应系统测定脱氢酶 可利用所谓"色原"底物颜色变化测定某些水解酶 常测定NAD(P)H→NAD(P)在340nm波长下吸光度上升
乙醇氧化酶 乙醇脱氢酶 乙醇水解酶 乙醛氧化酶 乙醛脱氢酶
NAD+在340nm波长处有吸收峰 NADH在340nm波长处有吸收峰 NAD+在280nm波长处有吸收峰 NADH在280nm波长处有吸收峰 只是由于乳酸脱氢酶分布广,容易得到
NAD+在340nm波长处有吸收峰 NADH在340nm波长处有吸收峰 NADH在280nm波长处有吸收峰 NAD+在280nm波长处有吸收峰
均可采用乳酸脱氢酶为工具酶 乳酸脱氢酶测定乳酸时,试剂中加NADH作为LDH的辅酶 均可采用酶法测定 乳酸脱氢酶测定丙酮酸时,340 nm为其检测波长 乳酸测定还可采用乳酸氧化酶法
NAD+在340nm波长处有吸收峰 NADH在340nm波长处有吸收峰 NADH在280nm波长处有吸收峰 NAD+在280nm波长处有吸收峰
340nm 405nm 520nm 600nm 630nm
NADPH NADP+ NADH NAD+ COA
在不停止酶反应条件下测底物的变化量 在不停止酶反应条件下测产物的变化量 临床上应用最广泛的有NAD(P)H反应系统测定脱氢酶 可利用所谓“色原”底物颜色变化测定某些水解酶和一些转移 常测定NAD(P)H→NAD(P)+在340nm波长下吸光度上升
340nm 360nm 540nm 000nm 480nm
NADPH NADP+ NADH NAD+ CoAB
340nm 360nm 540nm 500nm 480nm