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基因操作程序的第一步是基因表达载体的构建 将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是农杆菌的转化法 将目的基因导入动物细胞最常用的方法是显微注射法 检测目的基因的是否导入和转录均采用DNA分子的杂交技术
基因非编码区对于目的基因在块茎细胞中的表达是不可缺少的 从cDNA文库中获得的目的基因有内含子,没有启动子 目的基因可以通过农杆菌转化法导入受体细胞 用同一种限制酶,分别处理质粒和含目的基因的DNA,可产生相同的黏性未端进而形成重组DNA分子
受体细胞应是马铃薯块茎细胞,而不是叶肉细胞 该马铃薯含有人奶主要蛋白的变异属于基因重组 为获得重组质粒,必须用不同的限制酶切目的基因和质粒 人体细胞中人奶主要蛋白基因编码区的碱基对数等于人奶主要蛋白氨基酸数的3倍
化学合成法 cDNA文库 物理方法 基因组DNA文库 PCR法
马铃薯的叶肉细胞可用作为受体细胞 目的基因的成功导入是目的基因在受体细胞中表达的前提 采用“基因文库法”获得目的基因是最常用的获得目的基因的方法 一般采用同一种限制性内切酶分别处理质粒和含目的基因的DNA
利用聚合酶链式反应,扩增需要的目的基因 用化学方法合成目的基因 构建基因文库,从文库中调取目的基因 直接从细胞内总DNA中分离目的基因
甲方法获得的基因片段和DNA分子上该基因片段碱基序列相同 乙方法获得的基因片段和DNA分子上该基因片段长度不完全相同 甲方法要以脱氧核苷酸为原料 乙方法需要逆转录酶参与