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基因探针有放射性同位素或荧光分子等标记 基因探针是目的基因的一段DNA片段 基因探针能与目的基因的表达产物杂交 基因探针可用于进行基因诊断
缺口移位法 化学偶联法 光化学法 末端标记法 电化学法
可形成DNA-DNA杂交 可形成RNA-DNA杂交 杂交使用的探针是一短片段DNA或RNA 探针在使用前应先进入标记 不同来源的核酸间不能形成杂交分子
标记前、后的探针分子结构不相同 标记探针的检测方法简便、节时 准确可靠 重复性好 安全无害
是目前应用最多的一类探针标记物 对操作人员和实验室以及环境易存在潜在危害和污染等 灵敏性高,特异性高,准确性高 具有衰变特性而且半衰期短,费用高,检测时间长 已经被非放射性标记物替代
DNA探针带有标记物 杂交体为单链DNA片段 DNA探针借氢键与样品中DNA结合 在高温.高pH值条件下杂交 杂交体用放射自显影方法检测
基因探针的工作原理是碱基互补配对 待测的DNA分子首先要解旋变为单链,才可用基因探针检测 待测的DNA分子可以直接用基因探针测序 用标记的目的基因做探针,可以与目的基因转录出的mRNA杂交
基因探针的工作原理是碱基互补配对 基因探针既可以检测DNA分子,又可以检测基因转录产物RNA 基因探针往往带有放射性或荧光标记,便于检测 基因探针是一小段具有随机脱氧核苷酸序列的单链DNA
末端标记的探针常用于杂交分析 酶促标记法是最常用的标记方法,产生比化学标记法高的敏感性 末端标记的探针比均匀标记的探针有更高的活性 酶促标记法简便、快速、标记均匀 均匀标记的探针主要用于DNA的测序
既能标记DNA,又能标记RNA 既能标记双链DNA又能标记单链DNA 只能标记突出的5’端不能标记其他类型末端 DNA或RNA必须有5’-OH的存在
标记方法成熟,有多种标记方法可供选择 可以克隆到质粒载体中进行无限繁殖,制备方法简便 适用于基因表达的检测 相对于RNA而言,cDNA探针不易降解 不含有基因的内含子序列,用于检测基因表达时杂交效率要明显低于DNA探针
DNA分子探针检测疾病时应用到碱基互补配对原则 一种DNA分子探针可检测多类疾病 制备DNA分子探针时要知道被检测标本的遗传信息 DNA分子探针是标记的DNA分子
酶促标记法是最常用的标记方法,产生比化学标记法高的敏感性 酶促标记法简便、快速、标记均匀 末端标记的探针比均匀标记的探针有更高的活性 末端标记的探针常用于杂交分析 均匀标记的探针主要用于DNA的测序
代谢标记法 磷酸化法 切口平移法 体外转录法 引物延伸法
实时PCR技术不需要探针 用于核酸分子杂交 用于DNA印迹或RNA印迹 探针序列已知,可通过对探针的检测来判断核酸样品的相关信息 探针的标记是为了方便后续的检测
基因治疗的主要方法是让患者口服一些健康的外源基因 基因治疗在发达国家已成为一种常用的临床治疗手段 用放射性同位素或荧光分子等标记的蛋白质分子 用放射性同位素或荧光分子等标记探针的目的是便于追踪
探针长度一般是十几个碱基到几千个碱基不等 要加以标记、带有示踪物,便于杂交后检测 具有高度特异性,只与靶核酸序列杂交 应是单链,若为双链用前需先行变性为单链 作为探针的核苷酸序列要选取基因非编码序列
随机引物法 缺口平移法 T4多核苷酸激酶标记DNA的5′末端 Klenow片段标记DNA的3′末端 PCR标记法
标记方法成熟,有多种标记方法可供选择 可以克隆到质粒载体中进行无限繁殖,制备方法简便 适用于基因表达的检测 相对于RNA而言,cDNA探针不易降解 不含有基因的内含子序列,用于检测基因表达时杂交效率要明显低于DNA探针