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RT-PCR PCR WesternBlot SouthernBlot 水解法
合成终止法 化学断裂法 杂交法 PCR法 基因芯片法
Edman降解法 双脱氧链末端终止法 化学降解法 氧化-还原法 水解法
A,T,C,G A,U,C,G A,C,G A,T,C A,U,C
DNA聚合酶 dNTP dNDP ddNTP ddNDP
Klenow片段 测序酶 大肠埃希菌DNA聚合酶 序列酶 Taq DNA聚合酶
其亚克隆载体序列的随机引物 其亚克隆载体序列的定向引物 其亚克隆载体序列的待测引物 其亚克隆载体序列的通用引物 其亚克隆载体序列的双链引物
Sanger Pauling Jacob Monod
该法的测序载体不确定 该法的测序引物不确定 该法的DNA聚合酶不确定 该法的待测模板不确定 该法测定的序列是酶促反应生成的产物
Edman降解法 双脱氧链末端终止法 化学降解法 氧化-还原法 水解法
碱基与特殊染料间不同的相互作用 一个合成引物的延伸和DNA修复合成的可靠终止 限制性位点与DNA末端标记的相关性 可同时对DNA双螺旋的两条链进行测序 反应是DNA特异的,RNA不会带来干扰。这样既减少纯化步骤,也节约了开支
dNTP 标记的dNTP ddNTP 标记的ddNTP dNTP与ddNTP
根据酶促反应的结果直接判读 根据链末端终止反应直接判读 根据电泳结果直接判读 根据模板链序列推知互补链序列 根据互补链序列推知模板链序列
化学降解法 生物质谱法 链末端终止法 杂交测序法 全新的测序原理
其基本原理是利用DNA的体外合成过程 反应体系中需加入dNTP和ddNTP ddNTP可以形成磷酸二酯键而掺入到DNA链中 dNTP掺入后可导致新合成链在不同的位置终止 生成的反应产物是一系列长度不同的多核苷酸片段
Edman降解法 双脱氧链末端终止法 化学降解法 氧化-还原法 水解法
标记的dNTP ddNTP dNTP 标记的ddNTP dNTP与ddNTP
DNA聚合酶不同 dNTP的种类不同 dNTP的浓度不同 引物不同 双脱氧链末端终止法测序反应体系中还需加入ddNTP