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修复反应,制备平末端 标记DNA 3’突出末端 制备单链DNA探针 切割单链DNA
修复反应,制备平末端 标记DNA 3'突出末端 制备单链DNA探针 切割单链DNA
单链DNA 双链DNA cDNA 单链RNA 以上都可以
核酸探针根据核酸的性质,可分为DNA和RNA探针 RNA探针一般都是单链 分子生物研究中,DNA探针最为常用 DNA:DNA杂交体比RNA:DNA杂交体具有更高的稳定性 在PCR反应的过程中加入标记的单核苷酸,扩增的产物即可作为探针
DNA探针带有标记物 杂交体为单链DNA片段 DNA探针借氢键与样品中DNA结合 在高温.高pH值条件下杂交 杂交体用放射自显影方法检测
基因探针的工作原理是碱基互补配对 待测的DNA分子首先要解旋变为单链,才可用基因探针检测 待测的DNA分子可以直接用基因探针测序 用标记的目的基因做探针,可以与目的基因转录出的mRNA杂交
单链DNA 双链DNA CDNA 单链RNA 以上都可以
基因探针的工作原理是碱基互补配对 基因探针既可以检测DNA分子,又可以检测基因转录产物RNA 基因探针往往带有放射性或荧光标记,便于检测 基因探针是一小段具有随机脱氧核苷酸序列的单链DNA
用M13噬菌体载体合成 用不对称PCR合成 用缺口平移法合成 用mRNA逆转录合成
直接检测病毒DNA的碱基序列 检测病毒蛋白质的氨基酸序列 与被检测病毒DNA杂交进行检测 A.B.C三种方法均可
双链DNA、单链DNA、RNA都是可以标记的 不需用DNA酶Ⅰ预处理 反应时可用Klenow酶 反应时可用DNA聚合酶Ⅰ
寡核苷酸探针 用PCR方法合成的探针 以DNA为模板转录的RNA双链探针 以cDNA为模板转录的cRNA单链探针 质粒随机引物法标记的探针
既能标记DNA,又能标记RNA 既能标记双链DNA又能标记单链DNA 只能标记突出的5’端不能标记其他类型末端 DNA或RNA必须有5’-OH的存在
与被检测病毒的DNA碱基序列进行比较 与被检测病毒的DNA碱基序列进行组合 与被检测病毒的DNA碱基序列进行杂交 A.B.C三种方法均可
标记方法成熟,有多种标记方法可供选择 可以克隆到质粒载体中进行无限繁殖,制备方法简便 适用于基因表达的检测 相对于RNA而言,cDNA探针不易降解 不含有基因的内含子序列,用于检测基因表达时杂交效率要明显低于DNA探针
碱性磷酸酶探针和辣根过氧化物酶探针 放射性探针和非放射性探针 DNA探针和RNA探针 单链探针和双链探针 生物素探针和地高辛探针
标记方法成熟,有多种标记方法可供选择 可以克隆到质粒载体中进行无限繁殖,制备方法简便 适用于基因表达的检测 相对于RNA而言,cDNA探针不易降解 不含有基因的内含子序列,用于检测基因表达时杂交效率要明显低于DNA探针