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基因枪法导入植物体细胞的方法比较经济有效 显微注射技术是转基因动物中采用最多的方法 大肠杆菌最常用的转化方法是感受态细胞法 农杆菌转化法是将目的基因导入植物细胞最常用的方法
重组表达载体DNA分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合即完成了转化 农杆菌转化法是将目的基因导入植物细胞采用最多的方法,但对大多数单子叶植物并不适用 需通过某种处理使大肠杆菌成为感受态细胞,以便进一步完成转化 显微注射技术是将含有目的基因的表达载体注射到受精卵中
利用农杆菌介导转化 利用病毒作为基因递送载体 基因枪直接转化DNA 微注射法
农杆菌转化法是获得转基因植物的比较经济和有效的方法 显微注射技术是转基因动物中采用最多的方法 大肠杆菌最常用的转化方法是使细胞的生理状态发生改变 早期的基因工程操作一般不用原核生物作为受体细胞
天然质粒都含有标记基因和限制酶识别位点,故常作为基因工程的载体 噬菌体作为基因工程载体可以将重组DNA导入到动物受体细胞而获得转基因动物 农杆菌可将以其Ti质粒为载体的重组质粒导入植物细胞以获得相关转基因植物 采用乳腺细胞为目的基因的受体细胞,可获得乳汁中含有相应的产物的转基因动物
原生质体融合 农杆菌介导的植物转化 有性杂交 h-噬菌体为载体的操作
构建基因表达载体 用同一种限制酶切割 动物细胞核移植 用去核卵(母)细胞作受体 植物体细胞杂交培育新品种 花粉粒 将目的基因导入双子叶植物细胞 农杆菌转化法A.AB.BC.CD.D
导入双子叶植物细胞时常采用农杆菌转化法 使用的运载体有质粒、噬菌体衍生物和动植物病毒等 导入动物细胞时常采用显微注射法 目的基因导入受体细胞后,受体细胞即发生基因突变
受体细胞用植物的受精卵或体细胞均可 此过程中要用到植物组织培养 约80%的转基因植物都是通过农杆菌转化法培育出来 只有整个重组Ti质粒完整地嵌插到植物细胞的染色体DNA上,转化才能成功
Ti质粒含有对宿主细胞生存具有决定性作用的基因,是基因工程中重要的载体 用Ca2+处理细菌是重组Ti质粒导入土壤农杆菌中的重要方法 含重组Ti质粒的土壤农杆菌成功感染植物细胞,可通过植物组织培养技术将该细胞培养成具有抗虫性状的植物 若能够在植物细胞中检测到抗虫基因,则说明将重组质粒成功地导入到了受体细胞
导入植物细胞时均采用农杆菌转化法 转基因动物的获得多数运用基因枪法 大肠杆菌作为受体细胞时通常需要使用钙离子处理 导入目的基因的动物受精卵在培养液中发育成转基因动物
导入植物细胞时均采用农杆菌转化法
转基因动物的获得多数运用基因枪法
大肠杆菌作为受体细胞时通常需要使用钙离子处理
导入目的基因的动物受精卵在培养液中发育成转基因动物
利用PCR技术可以大量扩增目的基因 目的基因导人受体细胞最常用的方法是农杆菌转化法 只能用一种限制酶分别切割运载体和目的基因,便于两者连接 利用运载体上标记基因的相关特性就可检测出目的基因已导入受体细胞并成功表达